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DEPC 水和 DEPC 处理水的区别
人阅读 发布时间:2015-11-24 17:17
DEPC 即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是 RNA 酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中,所有液体试剂都应经 DEPC 处理。 在做 RNA 提取实验时, 实验器具要用「DEPC 水」处理过,溶液一般都要用“DEPC 处理水”来配制。
DEPC 处理水(即 RNAase-free ddH2O)
配制方法是:取市售 DEPC 1 ml,加入 1L 待处理水(蒸馏水等) 中(即终浓度含 0.1% DEPC 的水),经猛烈振摇后,于室温静止数小时,然后高压灭菌,以除去降解 DEPC(DEPC 分解为 CO2 和乙醇)。
注意:① DEPC 是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。② 含有 Tris 缓冲液的溶液中,不能加入 DEPC。
DEPC 水
是指终浓度含 0.1% DEPC 的水, 在 1000 ml 双蒸水中加入 DEPC 原液 1 ml,然后摇匀过夜。
误区一:重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。由于 DEPC 较贵,而且书上说 DEPC 要用高压灭菌处理去除,于是有些人就萌发了重复使用 DEPC 的想法,即对含有 DEPC 的水不进行高压灭菌,从而重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。节约本是好事,但这样的节约是无效的。为什么不能重复使用含 DEPC 的水,因为 DEPC 在水溶液中不稳定,极易分解,DEPC 在 pH6.0 和 pH7.0 的 PBS 缓冲液中的半衰期分别约为 20 min 和 10 min,DEPC 在水中的半衰期约为 30 min。因此,重复使用含 DEPC 的水就不能保证枪头和离心管的 RNase-free。
误区二:溶液中 DEPC 含量约高,灭活 RNase 的效果越好。这个误区错了一半,的确,1% DEPC 能灭活高达 1000 ng/ml 的 RNase A,而 0.1% DEPC 只能灭活少于 500 ng/ml 的 RNase A。但是溶液中残留的 DEPC 副产物会抑制一些酶反应,例如 DEPC 副产物会抑制体外转录反应,因此 DEPC 含量越高,高压灭菌后的 DEPC 副产物就越多,抑制越明显。
误区三:必需长时间高压灭菌来彻底去除 DEPC.用 DEPC 处理过的溶液,在 15-20 min 的高压灭菌后还可以闻到一股特殊的香味,因此有人认为高压灭菌去除 DEPC 不彻底,所以要延长高压灭菌的时间以完全去除 DEPC。但是延长高压灭菌的时间并不需要,因为闻到的特殊香味不是 DEPC 的,而是 DEPC 分解产物之一的乙醇同溶液中残留的微量的羧酸(如甲酸和乙酸等) 反应产生的挥发性脂类。这种特殊的水果香味不代表有痕量的 DEPC 残留。
北京索莱宝公司长期提供 DEPC 水和 DEPC 处理水两种产品,货号分别是 D8210 和 R1600。 特别是 DEPC 处理水可以直接用于实验耗材的 RNA 酶的清除作用。
DEPC 处理水(即 RNAase-free ddH2O)
配制方法是:取市售 DEPC 1 ml,加入 1L 待处理水(蒸馏水等) 中(即终浓度含 0.1% DEPC 的水),经猛烈振摇后,于室温静止数小时,然后高压灭菌,以除去降解 DEPC(DEPC 分解为 CO2 和乙醇)。
注意:① DEPC 是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。② 含有 Tris 缓冲液的溶液中,不能加入 DEPC。
DEPC 水
是指终浓度含 0.1% DEPC 的水, 在 1000 ml 双蒸水中加入 DEPC 原液 1 ml,然后摇匀过夜。
误区一:重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。由于 DEPC 较贵,而且书上说 DEPC 要用高压灭菌处理去除,于是有些人就萌发了重复使用 DEPC 的想法,即对含有 DEPC 的水不进行高压灭菌,从而重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。节约本是好事,但这样的节约是无效的。为什么不能重复使用含 DEPC 的水,因为 DEPC 在水溶液中不稳定,极易分解,DEPC 在 pH6.0 和 pH7.0 的 PBS 缓冲液中的半衰期分别约为 20 min 和 10 min,DEPC 在水中的半衰期约为 30 min。因此,重复使用含 DEPC 的水就不能保证枪头和离心管的 RNase-free。
误区二:溶液中 DEPC 含量约高,灭活 RNase 的效果越好。这个误区错了一半,的确,1% DEPC 能灭活高达 1000 ng/ml 的 RNase A,而 0.1% DEPC 只能灭活少于 500 ng/ml 的 RNase A。但是溶液中残留的 DEPC 副产物会抑制一些酶反应,例如 DEPC 副产物会抑制体外转录反应,因此 DEPC 含量越高,高压灭菌后的 DEPC 副产物就越多,抑制越明显。
误区三:必需长时间高压灭菌来彻底去除 DEPC.用 DEPC 处理过的溶液,在 15-20 min 的高压灭菌后还可以闻到一股特殊的香味,因此有人认为高压灭菌去除 DEPC 不彻底,所以要延长高压灭菌的时间以完全去除 DEPC。但是延长高压灭菌的时间并不需要,因为闻到的特殊香味不是 DEPC 的,而是 DEPC 分解产物之一的乙醇同溶液中残留的微量的羧酸(如甲酸和乙酸等) 反应产生的挥发性脂类。这种特殊的水果香味不代表有痕量的 DEPC 残留。
北京索莱宝公司长期提供 DEPC 水和 DEPC 处理水两种产品,货号分别是 D8210 和 R1600。 特别是 DEPC 处理水可以直接用于实验耗材的 RNA 酶的清除作用。