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Solarbio

试剂

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北京索莱宝科技有限公司是一家集研发、生产、销售、服务于一体的高科技生物企业。总部位于北京,并在上海、哈尔滨等全国30多个省市设有分公司和代理机构。涉及的产品被中国科学院、清华、北大、复旦等知名科研院所广泛使用,可靠而稳定的质量和完善的售后服务确立了“solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念,拥有专业的研发和质量检测团队以及先进的仓储和物流系统。“Solarbio”品牌已经得到全国科研工作者的认可,成为广大经销商推崇的名牌产品。
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Oxoid

试剂

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品牌介绍
英国Oxoid于1924年成立,现属于知名的Thermo Fisher Scientific集团一员,目前为领先全球的微生物培养基制造商与诊断试剂销售商。公司总部位于英国贝星斯托克(Basingstoke),产品销售遍及欧盟各国、美洲与澳洲,另外也委托世界各地专业的微生物产品代理商经营国际Oxoid事业。Oxoid产品范围阔及与疾病、微生物诊断相关的临床检验科学、基础学术研究与工业生产领域。英国Oxoid是世界上第二大微生物相关产品的生产商,总部设在英格兰Basingstoke,在全球14个国家设有分公司,并在62个国家和地区设有经授权的代理商。Oxoid培养基、微生物培养、诊断试剂、生化鉴定、药敏纸锭
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greiner bio-one

培养

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Greiner Bio-One GmbH 是全球品种最齐全,技术最专业的实验室一次性耗材的供应商之一。自 1963 年 Greiner Bio-One 研制出第一个细菌培养皿,目前在全球拥有 1400 名员工,分布在欧洲、北美和亚洲 19 个办事处。公司的生产基地分别位于德国、奥地利、美国、巴西和匈牙利。业务已涉及全球 100 多个国家。
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BioGems

抗体

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2014年PeproTech公司推出自己的流式细胞术产品品牌,即BioGems。BioGems意为生物钻石,其产品涵盖多种荧光标记的流式抗体、具有生物活性的功能性抗体,以及流式细胞术辅助试剂,如溶血剂和破膜剂等。BioGems产品全部在美国生产,相信其优异的品质和低于其它国际流式厂商的价位将能为广大用户提供更好的选择。
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北京索莱宝科技有限公司

入驻年限:12 年

  • 联系人:

    索莱宝

  • 所在地区:

    北京

  • 业务范围:

    试剂、实验室仪器 / 设备、耗材、技术服务

  • 经营模式:

    生产厂商 经销商 代理商

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聊聊细胞分离和培养那些事儿

人阅读 发布时间:2019-07-12 13:57

细胞培养是生命科学研究的重要方法之一。同时,在原代细胞培养的过程中,首要任务是从组织中分离细胞。但看似简单的细胞分离和培养技术,却不知难倒了多少英雄好汉。下面索莱宝和大家聊聊细胞分离与培养那些事儿。

 

 

如何分离细胞?

 

 

从原代组织中分离细胞,将组织块分离(散)成细胞悬液的方法有多种,最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。然而,为了更好地测定细胞免疫功能,我们需要从动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞单核细胞粒细胞等。分离这类免疫细胞的方法有:密度梯度离心法、黏附分离法、流式细胞仪分离法等其他分离法。目前最常用的是密度梯度离心法。索莱宝细胞分离液产品的研发原理就是基于不同细胞的密度差异,通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布

 

 

 

具体怎么实现呢?

 

 

以分离人外周血淋巴细胞为例:

  1. 取新鲜抗凝全血(EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝均可)或者去纤维蛋白血液,用等体积的全血及组织稀释液或者PBS稀释全血。

  2. 在离心管中加入适量分离液,将稀释后的血液平铺到分离液液面上方,注意保持两液面界面清晰。

  3. 室温,水平转子500~1000g,离心20~30min。

  4. 离心后将出现明显的分层:最上层是稀释的血浆层,中间是透明的分离液层,血浆与分离液之间的白膜层即为淋巴细胞层,离心管底部是红细胞与粒细胞。

  5. 小心地吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中,10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。250g,离心10min。

  6. 弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。

  7. 重复步骤6。

  8. 弃上清,细胞重悬备用。

精选索莱宝相关产品

货号

产品名称

P8610

人外周血淋巴细胞分离液

R1018

细胞洗涤液

31800

RPMI Medium 1640

R1017

全血及组织稀释液

YA0902    

一次性巴氏德吸管-3ml

YA1332

真空采血管 肝素钠 PET材质(绿色)

 

 

 

细胞分离时别忘了做到这些!

 

 

  1. 无菌操作:在样品收集和分离过程中,应注意无菌操作,避免微生物污染。

  2. 保证新鲜:血液样本最好为新鲜抗凝血(采血2 h以内),避免冷冻和冷藏,最优抗凝剂选择为EDTA、枸橼酸和肝素。

  3. 分离液的保存:分离液使用时应始终保持室温(18℃~25℃),如室内温度较低,可将分离液预热。

  4. 细胞稀释及细胞洗涤液:稀释或洗涤细胞不可使用含的缓冲液及培养液,其成分会导致血细胞凝集,大大降低细胞得率及纯度。

  5. 注意添加顺序:样品在上,分离液在下,保持两液面界面清晰。

  6. 离心管:选用玻璃材质离心管。部分塑料制品因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。

  7. 离心:血液样本的粘稠度或者是温度差异,可能会影响分离效果,可以调节离心转数和离心时间,摸索最佳的分离条件。

 

 

 

如何选择细胞分离液产品?

 

 

1.要有针对性地选择产品。不同细胞的密度与体积是不同的,不同种属动物细胞的密度也是不同的。索莱宝针对不同客户科研需求,研发了不同种细胞的分离液,如:淋巴细胞分离液、粒细胞分离液、白细胞分离液和单个核细胞分离液;针对不同种属动物,研发了不同动物的细胞分离液,如:人、小鼠、大鼠、鸡、兔、牛、狗等等。同时,索莱宝细胞分离液系列产品满足了外周血、组织脏器、骨髓等不同样品的分离。索莱宝丰富多样的产品满足了客户的多种科研需求。

2. 要选择分层效果明显的产品。索莱宝细胞分离液产品,性价比高,分层效果明显。以人外周血淋巴细胞分离液为例,索莱宝分离液产品分离的白膜层非常清晰,而且白膜层没有弥散,效果优于其他品牌同类产品。

分层图

3.要选择细胞沉淀纯度高的产品。使用索莱宝的细胞分离液产品得到的淋巴细胞较为纯净,红细胞污染极少,纯度大于90%。比其他品牌分离液分离的效果都好。

沉淀对比图

索莱宝相关产品

P8610

人外周血淋巴细胞分离液

 

 

千辛万苦得到的细胞

以为大功告成?

接下来是细胞培养

万里长征才刚刚开始

稍不注意

一下回到解放前!

 

 

细胞培养要注意哪些?

 

 

  1. 无菌的环境与操作:在细胞培养的过程中,应保持无菌的实验环境并进行无菌操作。

  2. 培养液的选择:每种细胞应该选择适合它的培养液。索莱宝的多种细胞培养液产品满足了不同细胞的需求。

  3. 温度与pH值的监控:一般选择37℃和5% CO2培养体系。细胞培养液偏黄色的时候应及时更换培养液。

  4. 预热培养液:为了使细胞更好地贴壁,应注意提前预热培养液。

  5. 避免培养液暴露在荧光下:平时应注意将培养液储存在黑暗的环境中,荧光(紫外光)对于培养液(有细胞或无细胞)有不利影响。

  6. 传代接种密度:在细胞传代的过程中要保证合适的接种密度。通过细胞计数来控制细胞传代的接种密度。同时,要注意观察细胞的状态和生长速度。

  7. 避免细胞损伤:在细胞消化传代时,应注意胰蛋白酶的浓度以及消化的时间。轻柔地吹打细胞,避免机械损伤,选择适当的离心力。

  8. 细胞冻存与复苏:冻存液中要加入保护剂:甘油或二甲基亚砜(DMSO)。冻存时要进行梯度降温。细胞复苏选择在37℃的水溶液中进行,解冻细胞速度要快。解冻后,细胞冻存管外壁要用纸擦干,避免污染。

精选索莱宝相关产品

货号

产品名称

11011-8611

优级胎牛血清 (无噬菌体低内毒素)

T1300

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚红

P1400

青链霉素混合液(100×)细胞培养专用    

31600

DMEM(低糖,含双抗)

11965

DMEM 高糖,含L-谷氨酰胺、酚红,不含丙tong酸钠、HEPES

D8371

二甲基亚砜 DMSO (细胞培养级)

 

 

更多产品详情请联系:010-56371250,或者直接联系QQ:2748554845

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