索莱宝自主创新生化试剂盒产品的创新与应用

生化检测的目的是对生化代谢路径上的酶活性或者某些分析物的含量进行检测，所使用的原 理多为酶促偶联反应或者利用特定物质结构的化学反应显色，检测方法包括速率法、固定时间法和终点法，最终使用紫外-可见分光光度计或者酶标仪来进行比色分析。



三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle）是需氧生物体内普遍存在的代谢途径，是提供大量能量的重要代谢系统。原核生物中分布于细胞质，真核生物中分布在线粒体。

                             

三羧酸循环是一个由一系列酶促反应构成的循环反应系统，在该反应过程中，首先由乙酰辅酶 A（乙酰-CoA）与草酰乙酸 (OAA) 缩合生成含有 3 个羧基的柠檬酸，经过 4 次脱氢，1 次底物水平磷酸化，最终生成 2 分子 CO2，并且重新生成草酰乙酸的循环反应过程。

三羧酸循环的中间产物（如草酰乙酸、α-酮戊二 酸）可被糖异生、脂类的生物合成（包括脂肪酸 和胆固醇的生物合成）、氨基酸的生物合成、卟啉类的生物合成等途径利用。

因此三羧酸循环是糖类、脂类、氨基酸代谢的最 终代谢的共同途径，又是糖类、脂类、氨基酸代谢联系的枢纽。

线粒体异柠檬酸脱氢酶

异柠檬酸脱氢酶是在三羧酸循环酶促反应中的限速步骤，也是该途径第一次脱羧并伴随有 NAD+ 转换为 NADH。

根据辅酶的不同，该酶分为 NAD 依赖型异柠檬酸脱氢酶和 NADP 依赖型异柠檬酸脱氢酶，其中，线粒体异柠檬酸脱氢酶为 NAD 依赖性异柠檬酸脱氢酶，只存在于真核细胞里。

线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm）与线粒体基因表达及线粒体功能有关，对生物体的整个生物的生命代谢有很大影响。

目前的检测方法：检测酶促反应中 NADH 的生成量来计算酶活。

缺点：但是 NADH 的变化通常比较小，尤其是当样本酶活性较小时，很容易发生逆反应或其他反应而产生负值变化。 此反应物无颜色变化，无法从颜色变化上判断酶活。

线粒体异柠檬酸脱氢酶—创新和新颖性

检测反应生成的 α-酮戊二酸的红棕色产物（在 505nm 处有吸光度变化）可以计算出线粒体异柠檬酸脱氢酶活力高低，检测该产物在 505nm 处吸光值的变化可以避免酶活较低时产生负值，也可以让数值变化更明显，使得实验结果准确可靠。

此反应为显色反应，相较于传统的无颜色变化的测定方法，使酶活可视化，能从颜色变化上对酶活有初步的判断。

线粒体异柠檬酸脱氢酶—实验对比

使用 2 种方法检测不同活性的线粒体异柠檬酸脱氢酶，发明方法计算的酶活无显著差异并和实际活性相当，相对误差在 ±5~6% 之内；用传统方法检测线粒体异柠檬酸脱氢酶，计算结果和真实值相差很大。
 

线粒体异柠檬酸脱氢酶—加标回收

加标回收率均在 96%-105% 以内，偏差均在 5% 以内。
 

线粒体异柠檬酸脱氢酶---稳定性

将各试剂分别放于对应温度，按时间 0 天、1 个月、2 个月、4 个月、8 个 月、12 个月取出并进行实验对比不同存放时间的数据变化，以验证本系统的稳定性。
 

文献支持

近期，中国检验检测学会科研试剂分会组织了 2023 年度自主创新试剂前 10 的评选，很荣幸索莱宝自主研发产品 「三羧酸循环酶系列检测生化试剂盒」 获奖，并于 2023 年 11 月 23 日，索莱宝做客喀咖讲堂，给大家带来了关于生化试剂盒产品创新与应用的精彩直播。本次活动吸引了众多科研院所、高校及产业机构的观众广泛参与，直播间内互动频繁、气氛热烈。

                                            

本次直播，详细讲解了三羧酸循环酶检测系列产品，并以授权发明专利产品（线粒体异柠檬酸脱氢酶检测试剂盒）为例，分析了该产品的创新点，向大家介绍了一种测定其酶活的新方法，即检测酶促反应生成的 α-酮戊二酸的红棕色产物，可以通过吸光度变化来判断酶活力高低，该试剂盒的测定方法和传统方法相比，通过颜色的变化来反应酶活，既避免了逆反应的负值，也可以使酶活可视化，从而提高实验结果的准确性和可靠性。本产品可应用于研究细胞代谢与调控、基因表达、酶活测定等实验，为科研工作者提供便捷、高效的实验解决方案。最后，对生化试剂盒进行了全面介绍，包括检测用具、生产流程、产品优势、文献引用和技术服务等方面，为用户提供正确的产品选用方案，为生物学研究提供有力保障。同时，索莱宝为老师和同学们也送出了小米充电宝、小兔恒温加热暖心杯、精美笔记本和索莱宝吉祥物等礼品。另外，现场也设置了答疑环节，为客户解决了实验和产品上的疑惑。本次直播在愉快的氛围中圆满结束，让大家对三羧酸循环酶系列检测生化试剂盒的创新与应用有了更深入的了解，也为科研工作者提供了新的实验思路。

研究领域：探究线粒体代谢、调控调节相关的辅助性工具，用于观察代谢规律或者验证不同的实验动作

使用院校：生命科学、农学、食品、林学、环境相关；药学、医院

产品试剂盒介绍：


 

索莱宝三羧酸循环系列检测产品

温馨提示

索莱宝生化试剂盒货号以 「0」、「5」 结尾，分别代表两类反应体系。以 「0」 结尾的代表试剂盒所用方法为分光光度法（反应体系约 1mL），可以用分光光度计进行检测；以 「5」结尾的试剂盒代表所用方法为微量法（反应体系约 0.2mL），可以用分光光度计或者酶标仪进行检测。

检测用具

根据测定波长，选择可以不同的比色皿或 96 孔板，根据需求，选择使用分光光度计或者酶标仪进行吸光值的测定。

产品优势

未来，索莱宝将继续关注科研工作者的深层次需求，加大自主研发，加快产品创新，扩展应用领域，努力提供高品质的产品和高效率的服务，助力科研成果的产出与转化。